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N-glycan preparation from IgG in less than 2 hours

EZGlyco™ mAb-N Kit with 2-AB kit 은 IgG 로부터 N-glycan 을 분리, 정제한 후 형광물질 (2-AB)을 부착하여 분석할 수 있도록 하는 전처리 시약입니다. 주로 바이오의약품 생산 공정 중의 배양액 또는 정제되지 않은 검체 내에 포함된 Immunoglobulin (IgG) 에 부착된 N-glycan 구조를 분석하고자 할 때 유용합니다. 한 컬럼 상에서 IgG 정제, 당분리, 형광 labeling 전 과정을 모두 수행하기 때문에 샘플 이동 시에 발생할 수 있는 손실을 최소화하고 시간을 절약할 수 있습니다. 한 키트 내에 PNGase F, deglycosylation enzyme 등의 전처리 효소 및 non-toxic reductant 가 포함된 2-aminobenzamide labeling 시약이 모두 포함되어 있어 사용자의 편의와 안전성을 기대할 수 있습니다.

그림 1. IgG 의 여러가지 당쇄 패턴 및 특성. www.phrma.org, modified

그림 2. 일반적인 IgG 의 N-Glycan 분석 방법

합성 의약품과는 다르게, 생물공정으로 배양하여 얻은 당단백질 (항체 의약품 포함) 은 완전히 같은 구조를 얻기 힘들고 매우 다양한 당쇄패턴을 갖게 됩니다. 특히 숙주세포의 종류, 배양 조건 등에 따라 변화되고 이는 생물학적 활성 및 안정성에 영향을 줄 수 있기 때문에 당쇄 분석을 통해 패턴을 확인하는 작업은 매우 중요합니다. 기존의 N-glycan 분석 방법을 이용하여 IgG 의 N-glycan 을 분석하고자 할 때 매우 긴 전처리 과정 때문에 전체 공정 시간이 거의 2~3 일 가까이 소요되는 문제를 안고 있었습니다. 최근 이를 극복하기 위한 여러 시약들이 개발되었고, 그 중 스미토모 社는 빠르고 효과적인 IgG 용 당분리 컬럼을 개발하여 형광 labeling 까지 약 2~3 시간밖에 걸리지 않는 EZGlyco kit 을 출시하였습니다.

그림 3. EZGlyco kit 을 이용한 IgG 내 N-glycan 전처리 과정 모식도

제품특징 1. HPLC-Ready in Under 2 Hours – 2 시간 내 HPLC 분석용 N-glycan 확보 (UPLC/HPLC-MS 로도 분석 가능) – 세포배양액으로부터 바로 IgG 의 N-glycan 만 분리하여 분석 – 간편한 사용법으로 작업 효율성 최적화 2. Streamlined N-glycan Sample Preparation – Single-Tube operation 으로 공정 간소화 – Deglycosylation 부터 2-AB labeling 까지 kit 하나로 해결! – Labeling 과정에서 cyanoborohydride 대신 무독성 reductant 를 이용 분석 예시 HPLC separation of 2-AB labeled N-glycans from human lgG prepared using Concentration-independent recovery of lgG N-glycans using EZGLyco mAb-N Kit